(57) 1. Препарат очищенной рекомбинантной гиалуронидазы Streptomyces koganeiensis ATCC 31394, имеющей аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, причем препарат содержит эндотоксин в количестве менее 0,5 ед./мг.
2. Способ получения препарата очищенной рекомбинантной гиалуронидазы Streptomyces koganeiensis ATCC 31394 по п.1, включающий следующие стадии:
a) засевают среду бактериальной культуры в биореакторе инокулятом рекомбинантных клеток, выбранных из клеток Escherichia coli и клеток Bacillus subtilis, которые трансформированы по меньшей мере одним вектором, содержащим кДНК последовательности SEQ ID NO: 41, кодирующую указанную в п.1 гиалуронидазу;
b) ферментируют содержимое биореактора при pH от 6,7 до 7,1 в присутствии питательного раствора;
c) добавляют индуктор лактозных генов в биореактор и инкубируют смесь в течение периода от 8 до 24 ч;
d) центрифугируют полученную суспензию бактериальных клеток и удаляют надосадочную жидкость, тем самым извлекая осадок, состоящий из указанных бактериальных клеток;
e) суспендируют полученный осадок и подвергают полученную суспензию осмотическому удару;
f) экстрагируют периплазматические белки из суспензии путем центрифугирования и выделяют белковую фракцию с ферментативной активностью гиалуронидазы;
g) очищают фракцию белка с ферментативной активностью гиалуронидазы с помощью методов, осуществляемых последовательно:
(i) сильной ионообменной хроматографии;
(ii) слабой катионообменной хроматографии и
(iii) хроматографии ароматического гидрофобного взаимодействия.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что в качестве питательного раствора на стадии b) используют раствор глицерина.
4. Полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеотидов SEQ ID NO: 17, кодирующую рекомбинантную гиалуронидазу, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21.
5. Рекомбинантный вектор, содержащий полинуклеотид по п.4.
6. Вектор по п.5, представляющий собой плазмиду.
7. Клетка-хозяин, содержащая вектор по п.5 или 6.
8. Фармацевтическая композиция, содержащая рекомбинантную гиалуронидазу, охарактеризованную в п.1, как единственный активный ингредиент или в сочетании с другим активным веществом, для лечения и/или предотвращения заболевания или нарушения, выбранного, по меньшей мере, из отеков, воспалительных состояний, обморожения, твердых опухолей, аллергических реакций, опосредованных IgE, заболеваний ротовой полости, внезапных кровоизлияний в стекловидное тело, артериосклероза, нарушений кровяного давления, сердечно-сосудистых заболеваний и нарушений мозгового кровообращения, таких как стеноз мозговых артерий или инсульт, или коровьего мастита.
9. Косметическая композиция, содержащая рекомбинантную гиалуронидазу, охарактеризованную в п.1, как единственный активный ингредиент или в сочетании с другим активным веществом, для эстетического улучшения внешнего вида у людей, пораженных целлюлитом или с небольшим количеством жировой массы.

---