(57) 1. Оптимизированная полинуклеотидная последовательность, кодирующая Cross Reacting Material 197 (CRM₁₉₇), содержащая SEQ ID NO: 2, и ее варианты, которые по меньшей мере на 88% гомологичны указанной оптимизированной полинуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 2.
2. Варианты SEQ ID NO: 2 по п.1, выбранные из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 8 и 9.
3. Способ получения CRM₁₉₇, включающий стадии:
a) выбора оптимизированной полинуклеотидной последовательности, кодирующей CRM₁₉₇, по существу состоящей из SEQ ID NO: 2, или ее вариантов, которые по меньшей мере на 88% гомологичны SEQ ID NO: 2,
b) лигирования полинуклеотидных последовательностей стадии (а) в подходящий вектор,
c) встраивания или трансформации полинуклеотидной последовательности в клетку-хозяина Escherichia coli,
d) культивирования трансформированной клетки в культуральной среде для экспресии CRM₁₉₇ на высоком уровне,
e) поддержания индуцирующей температуры между 10 и 40°С для продукции CRM₁₉₇,
f) экстракции CRM₁₉₇ из клетки-хозяина с последующей очисткой для получения чистого CRM₁₉₇ с высоким выходом.
4. Способ по п.3, в котором подходящий вектор представляет собой плазмидный вектор, выбранный из pET9а, pET3a, pET3b, pET3c, pET5а, pET5b, pET5c, pET9b, pET9c, pET12a, pTWIN1, pTWIN2, pET12b, pET12c, pET17b.
5. Способ по п.3, в котором штамм Escherichia coli выбран из BL21 (DE3), BL21 A1, HMS174 (DE3), DH5a, W3110, В834, origami, Rosetta, NovaBlue (DE3), Lemo21 (DE3), T7, ER2566 и С43 (DE3).
6. Способ по п.3, в котором выход CRM₁₉₇ составляет приблизительно 0,1 г/л, 0,25 г/л, 0,5 г/л, приблизительно 1 г/л, приблизительно 1,5 г/л, приблизительно 2 г/л, приблизительно 2,5 г/л, приблизительно 3 г/л, приблизительно 3,5 г/л, приблизительно 4 г/л, приблизительно 4,5 г/л, приблизительно 4,5 г/л, приблизительно 5 г/л.
7. Способ по п.3, в котором периплазматической экспрессии достигают путем обеспечения подходящей температуры индукции экспрессии полинуклеотида без какой-либо гетерологичной последовательности для направленного транспорта в периплазматическое пространство.
8. Способ по п.7, в котором температура индукции находится в диапазоне от 10 до 40°С.
9. Способ по п.6, в котором указанный CRM₁₉₇ конъюгирован с полисахаридными молекулами, выделенными из Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Pneumococcus, Haemophilus influenzae, Meningococcus, Streptococcus pneumoniae и других патогенных бактерий.
10. Способ по п.6, в котором указанный CRM₁₉₇ используют в качестве конъюгированного носителя для вакцин, таких как вакцины против Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Pneumococcus, Haemophilus influenzae, Meningococcus, Streptococcus pneumoniae и других патогенных бактерий.

---