(57) 1. Растение или часть растения табака, имеющие пониженный уровень содержания норникотина и содержащие мутацию в гене, который кодирует никотиндеметилазу CYP82E10, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E10 в положениях, соответствующих положениям 79, 107, 381 или 419 SEQ ID NO: 2, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
a) замены серином остатка глицина в положении 79;
b) замены серином остатка пролина в положении 107;
c) замены серином остатка пролина в положении 381;
d) замены серином остатка пролина в положении 419 и
e) любой их комбинации.
2. Растение или часть растения табака по п.1, где указанная никотиндеметилаза CYP82E10 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, 5-8 и 9.
3. Растение или часть растения табака по любому из пп.1 или 2, дополнительно включающие мутацию в гене, кодирующем никотиндеметилазу CYP82E4, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 14, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E4 в положениях, соответствующих положениям 329, 364, 376, 381 или 458 SEQ ID NO: 14, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
a) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 329;
b) замены аспарагином остатка лизина в положении 364;
c) замены метионином остатка валина в положении 376;
d) замены серином остатка пролина в положении 381;
e) замены серином остатка пролина в положении 458 и
f) любой их комбинации.
4. Растение или часть растения табака по п.3, где указанная никотиндеметилаза CYP82E4 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14-19 и 20.
5. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-4, дополнительно содержащие мутацию в гене, кодирующем никотиндеметилазу CYP82E5, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 26, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E5 в положениях, соответствующих положениям 422 или 449 SEQ ID NO: 26, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
a) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 422;
b) замены лейцином остатка пролина в положении 449 и
c) любой их комбинации.
6. Растение или часть растения табака по п.5, где указанная никотиндеметилаза CYP82E5 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 26-31 и 32.
7. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-6, где растение или часть растения табака является гомозиготным/гомозиготной по указанной мутации.
8. Растение или часть растения табака по п.7, где указанная никотиндеметилаза CYP82E10 содержит замену аминокислотного остатка в положении, соответствующем положению 381 SEQ ID NO: 2, указанная никотиндеметилаза CYP82E4 содержит замену аминокислотного остатка в положении, соответствующем положению 329 SEQ ID NO: 14, и указанная никотиндеметилаза CYP82E5 содержит замену аминокислотного остатка в положении, соответствующем положению 422 SEQ ID NO: 26, где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
а) замены серином остатка пролина в положении 381;
б) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 329;
в) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 422 и
г) любой их комбинации.
9. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-8, где в указанном растении или его части менее 1,5% никотина превращается в норникотин.
10. Растение или часть растения табака по п.9, где в указанном растении или его части не более 0,5% никотина превращается в норникотин.
11. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-10, где указанное растение табака представляет собой растение темного табака.
12. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-11, где указанное растение табака представляет собой растение, предназначенное для сушки на пару, воздушной сушки или огневой сушки.
13. Растение или часть растения табака по любому из пп.1-10, где указанное растение табака представляет собой Бёрли, Вирджинию или Ориентальный (восточный) табак.
14. Семя растения табака по любому из пп.1-13.
15. Потомство растения табака по любому из пп.1-13.
16. Табачный продукт, изготовленный из растения или части растения табака по любому из пп.1-13.
17. Табачный продукт по п.16, выбранный из группы, состоящей из биоразлагаемого наполнителя, сигареты, сигариллы, невентилируемой сигареты с фильтром, вентилируемой папиросы с фильтром, сигары, трубочного табака, нюхательного табака, жевательного табака, жевательной резинки, пастилки для рассасывания и растворимой пластинки.
18. Способ снижения онкогенного потенциала табачного продукта, включающий приготовление табачного продукта из растения или части растения табака по любому из пп.1-13.
19. Способ снижения уровня норникотина или снижения уровня превращения никотина в норникотин в растении или части растения табака, включающий введение мутации в ген никотиндеметилазы указанного растения или его части, кодирующий никотиндеметилазу CYP82E10, где указанная никотиндеметилаза CYP82E10 имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 2, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E10 в положениях, соответствующих положениям 79, 107, 381 или 419 SEQ ID NO: 2, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены серином остатка глицина в положении 79;
ii) замены серином остатка пролина в положении 107;
iii) замены серином остатка пролина в положении 381;
iv) замены серином остатка пролина в положении 419 и
v) любой их комбинации.
20. Способ по п.19, дополнительно включающий введение мутации в ген никотиндеметилазы указанного растения, кодирующий никотиндеметилазу CYP82E4, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 14, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E4 в положениях, соответствующих положениям 329, 364, 376, 381 или 458 SEQ ID NO: 14, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 329;
ii) замены аспарагином остатка лизина в положении 364;
iii) замены метионином остатка валина в положении 376;
iv) замены серином остатка пролина в положении 381;
v) замены серином остатка пролина в положении 458 и
vi) любой их комбинации.
21. Способ по п.19 или 20, дополнительно включающий введение мутации в ген никотиндеметилазы указанного растения, кодирующий CYP82E5 никотиндеметилазу, аминокислотная последовательность которой по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 26, причем указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E5 в положениях, соответствующих положениям 422 или 449 SEQ ID NO: 26, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 422;
ii) замены лейцином остатка пролина в положении 449 и
iii) любой их комбинации.
22. Способ по любому из пп.19-21, где указанная никотиндеметилаза CYP82E10 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 2, 5-8 и 9.
23. Способ по любому из пп.19-22, в котором указанная никотиндеметилаза CYP82E4 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 14-19 и 20.
24. Способ по любому из пп.19-23, в котором указанная никотиндеметилаза CYP82E5 имеет аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 26-31 или 32.
25. Способ по любому из пп.19-24, в котором указанное растение или часть растения табака является гомозиготным/гомозиготной по указанной мутации.
26. Способ по любому из пп.19-25, в котором указанные мутации вводят посредством скрещивания.
27. Способ по любому из пп.19-26, в котором указанное растение табака представляет собой растение темного табака.
28. Способ по любому из пп.19-26, в котором указанное растение табака представляет собой растение, предназначенное для сушки на пару, воздушной сушки или огневой сушки.
29. Способ по любому из пп.19-26, в котором указанное растение табака представляет собой Бёрли, Вирджинию или Ориентальный (восточный) табак.
30. Способ идентификации растения табака с низкими уровнями норникотина, включающий скрининг образца ДНК из представляющего интерес растения табака на присутствие мутации в гене, кодирующем никотиндеметилазу CYP82E10, раскрытую в любом из пп.1-10, где указанный ген включает последовательность нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1 или 3.
31. Способ по п.30, в котором указанное растение табака обладает неконвертируемым фенотипом.
32. Способ по п.30 или 31, в котором указанный скрининг осуществляют с использованием последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, 3, 35-37 и 38.
33. Способ по любому из пп.30-32, дополнительно включающий скрининг образца ДНК из представляющего интерес растения табака, в отношении присутствия мутации в гене, кодирующем никотиндеметилазу CYP82E4, определенную в п.3, присутствия мутации в гене, кодирующем никотиндеметилазу CYP82E5, определенную в п.5, или присутствия комбинации указанных мутаций.
34. Выделенный полипептид никотиндеметилазы CYP82E10, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
а) аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 5-12 или 13;
б) аминокислотной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 5-12 или 13; и
в) аминокислотной последовательности, которая представляет собой фрагмент аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 5-12 или 13, где указанный фрагмент содержит по меньшей мере 115 смежных остатков аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, 5-12 или 13;
где указанная аминокислотная последовательность содержит мутацию, определенную в п.1.
35. Выделенный полинуклеотид, кодирующий полипептид по п.34, содержащий нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:
а) нуклеотидной последовательности SEQ ID NO: 1, 3 или 4;
б) нуклеотидной последовательности, которая содержит фрагмент по меньшей мере из 900 смежных нуклеотидов SEQ ID NO: 1, 3 или 4;
в) нуклеотидной последовательности, которая по меньшей мере на 98% идентична на всем протяжении последовательности SEQ ID NO: 1;
г) нуклеотидной последовательности, которая комплементарна последовательности по одному из предыдущих подпунктов (а)-(в),
где нуклеотидная последовательность не кодирует полипептид, включающий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
36. Растение или часть растения табака, гомозиготное/гомозиготная по мутации в гене, который кодирует никотиндеметилазу CYP82E10, в гене, который кодирует никотиндеметилазу CYP82E4, и в гене, который кодирует никотиндеметилазу CYP82E5, где указанная мутация приводит к пониженной экспрессии или функции указанной никотиндеметилазы CYP82E10, CYP82E4 и CYP82E5, где:
а) указанная никотиндеметилаза CYP82E10 имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 2, и указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E10 в положениях, соответствующих положениям 79, 107, 381 или 419 SEQ ID NO: 2, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены серином остатка глицина в положении 79;
ii) замены серином остатка пролина в положении 107;
iii) замены серином остатка пролина в положении 381;
iv) замены серином остатка пролина в положении 419 и
v) любой их комбинации;
б) указанная никотиндеметилаза CYP82E4 имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности SEQ ID NO: 14, и указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E4 в положениях, соответствующих положениям 329, 364, 376, 381 или 458 SEQ ID NO: 14, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 329;
ii) замены аспарагином остатка лизина в положении 364;
iii) замены метионином остатка валина в положении 376;
iv) замены серином остатка пролина в положении 381;
v) замены серином остатка пролина в положении 458 и
vi) любой их комбинации;
в) указанная никотиндеметилаза CYP82E5 имеет аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 98% идентичную последовательности, представленной в SEQ ID NO: 26, и указанная мутация приводит к замене аминокислотного остатка в последовательности никотиндеметилазы CYP82E5 в положениях, соответствующих положениям 422 или 449 SEQ ID NO: 26, и где указанная замена выбрана из группы, состоящей из:
i) замены стоп-кодоном остатка триптофана в положении 422;
ii) замены лейцином остатка пролина в положении 449 и
iii) любой их комбинации.

---